PCR檢測試劑盒利用離心柱內硅基質膜提取豬偽狂犬病毒DNA,以此為模板,在特異引物和TaqDNA聚合酶的作用下,經高溫變性,低溫退火、中溫延伸的循環(huán),使特異的DNA片段拷貝數(shù)放大一倍。經過30次循環(huán),使擴增的DNA片段放大數(shù)百萬倍。將擴增的DNA片段進行電泳,經染色后在紫外燈照射下,肉眼可見DNA片段的擴增帶,進而判斷待檢樣本中是否含有豬偽狂犬病毒。
PCR檢測試劑盒具有下列特點:
1.根據(jù) DHBV 的保守序列設計的專一性引物,與相關病毒無交叉反應。
2.靈敏度比常規(guī)PCR 高 2-3 個數(shù)量級,可以達到幾百拷貝/反應。
3.即開即用,用戶只需要提供樣品模板,操作簡單,定量準確快速。
4.一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續(xù)污染。
5.足夠 50 次 20μL 反應體系的熒光定量 PCR。
PCR檢測試劑盒的注意事項:
1.反應體系應在特定配液區(qū)或者超凈工作臺中配制,整個實驗過程嚴格控制污染。
2.PCR整個試驗分配液區(qū)、模板提取區(qū)、擴增區(qū)。流程順序為配液區(qū)→模板提取區(qū)→擴增區(qū)。嚴禁器材和試劑倒流。
3.使用不含熒光物質的一次性手套,一次性離心管。
4.反復凍融試劑將減低檢測靈敏度,本試劑盒應在5次內用完.
5.-20℃保存的各試劑管使用前應在室溫下*融化,液體融化后需*混勻,2000 rpm離心15 s ,使用后立即放回-20 ℃。
6.在RNA提取過程中,避免RNA酶污染,盡量縮短操作時間。
7.注意防止試劑盒組分受污染。不要使用超過有效期限的試劑,試劑盒之間的成分不要混用。
8.PCR反應管避免氣泡存在,管蓋需蓋緊。
9.不同批次的試劑盒勿混用。